https://repositorioinstitucional.uaslp.mx/xmlui/handle/i/8557 Sat, 25 Apr 2026 06:59:30 GMT 2026-04-25T06:59:30Z https://repositorioinstitucional.uaslp.mx/xmlui/handle/i/9755 Elucidando el mecanismo de interacción entre el receptor tipo cinasa CRK10 y el transportador de poliaminas AtPUT2 Morquecho Robledo, Mariana Las plantas, como organismos sésiles, han desarrollado complejas vías de transducción de señales para percibir y responder a estímulos ambientales. Los receptores tipo quinasa (RLKs) son componentes centrales de estas vías, vinculando señales ambientales a respuestas intracelulares. Aunque se ha identificado un gran número de receptores RLK en los genomas de plantas, sus ligandos que reconocen, sus funciones particulares y las proteínas con las que interactúan, incluyendo proteínas de membrana, solo han sido descritos en pocos casos. En este estudio investigamos el mecanismo de interacción entre el receptor tipo quinasa rico en cisteína AtCRK10 y el transportador de poliaminas de Arabidopsis thaliana AtPUT2, dos proteínas implicadas en la respuesta de defensa de las plantas. En particular nos enfocamos en determinar cuál de los tres dominios de AtCRK10, el extracelular, el transmembranal y el intracelular quinasa, interactúa in planta con la proteína AtPUT2, utilizando la técnica de Complementación Bimolecular de Fluorescencia (BiFC) en células de hoja de tabaco. Los análisis de BiFC mostraron que AtPUT2 puede interactuar con los dominios extracelulares y la quinasa de AtCRK10. Interesantemente, esta interacción depende de que el dominio quinasa sea funcional, ya que una variante que generamos mediante una mutación puntual en el ácido aspártico conservado, diseñada para inactivar la actividad quinasa en la proteína completa de AtCRK10, no produjo señal de fluorescencia, lo que sugiere una pérdida de la interacción. Por otra parte, la caracterización preliminar de líneas reporteras promCRK10::GFP-GUS y promCRK10::CRK0-GFP-GUS mostró que AtCRK10 se expresa en las hojas de la roseta, particularmente en las células guarda de los estomas, mientras que el uso de las reporteras promPUT2::GFP-GUS y promPUT2::PUT2-GFP-GUS mostró que el gen AtPUT2 también se expresa en hojas de la roseta. Proponemos un modelo en el que la activación del receptor AtCRK10 tras la detección de patógenos podría inducir su homodimerización y autofosforilación, lo que favorecería su interacción con el transportador AtPUT2 a través de sus dominios extracelular y quinasa. Esta interacción AtCRK10-AtPUT2 podría inducir el transporte de poliaminas en respuesta al ataque de patógenos.; Plants, as sessile organisms, have evolved intricate signal transduction pathways to perceive and respond to environmental stimuli. Receptor-like kinases (RLKs) are central components of these pathways, linking external cues to intracellular signaling. Although a vast number of receptors have been identified in plants´ genomes, their recognized ligands, specific functions, and interaction partners, including membrane proteins, have not been fully described. In this study, we investigate the interaction mechanism between the cysteine-rich receptor-like kinase AtCRK10 and the Arabidopsis thaliana polyamine transporter AtPUT2, both of which are implicated in plant immune responses. Particularly, we focus on determining which of the protein domains of AtCRK10, the extracellular, transmembrane, and intracellular kinase domains, interact with the AtPUT2 protein through Bimolecular fluorescence complementation (BiFC) assays in tobacco leaves. BiFC assays revealed that AtPUT2 interacts with the cytoplasmic kinase domain and the extracellular domain of AtCRK10. Interestingly, this interaction depends on a fully functional kinase domain; a death-kinase variant, obtained by a point mutation in the conserved aspartic acid that abolishes the kinase activity of the AtCRK10 protein, failed to produce a fluorescence signal, suggesting a loss of interaction. Moreover, preliminary characterization of reporter lines promCRK10::GFP-GUS and promCRK10::CRK0-GFP-GUS showed that AtCRK10 is expressed in rosette leaves, particularly in the guard cells of the stomata, while the evaluation of promPUT2::GFP-GUS and promPUT2::PUT2-GFPGUS reporter lines showed that AtPUT2 is also expressed in rosette leaves. We propose a model in which activation of AtCRK10 upon pathogen perception might induce its homodimerization and autophosphorylation, thereby facilitating its interaction with the AtPUT2 transporter through its extracellular and kinase domains. This AtPUT2-AtCRK10 interaction could induce polyamine transport upon pathogen activation. Wed, 07 Jan 2026 00:00:00 GMT https://repositorioinstitucional.uaslp.mx/xmlui/handle/i/9755 2026-01-07T00:00:00Z https://repositorioinstitucional.uaslp.mx/xmlui/handle/i/9154 Determinantes moleculares en el ensamblaje del virus de chikungunya Coronado Ipiña, Miguel Angel Uno de los virus que ha complicado el panorama epidemiológico en la actualidad es el virus de Chikungunya (CHIKV), un Alphavirus de la familia Togaviridae, descrito por primera vez en el sudeste de Tanzania en 1952. Los Alphavirus son virus envueltos que encapsulan su genoma de RNA de ~11,700 bases. La nucleocápside se organiza en una doble envoltura proteica con simetría icosaédrica. La capa interior que contiene al genoma está hecha de 240 copias de la proteína de la cápside (C). La capa exterior está separada de la interior por una bicapa lipídica y está formada por 240 subunidades proteicas en la cual se incrustan 80 picos trimétricos de heterodímeros de dos glicoproteínas, E1 y E2. La etapa final del ciclo infeccioso del CHIKV involucra su salida de la célula, y se sabe que la proteína E2 tiene un rol esencial en el proceso gracias a su asociación con la nucleocápside (con la proteína C). Sin embargo, especulamos que E1, así como la formación de los trímeros de heterodímeros también tienen un papel importante en este proceso de salida. Actualmente no existen tratamientos antivirales aprobados para combatir el CHIKV, por lo que, es necesario desarrollar estrategias de intervención para su control, esto debido a la grave sintomatología que puede desarrollar algunas personas. Para logar esto, es esencial entender del proceso de ensamblaje y gemación del virus. En este trabajo se analizó el efecto de tres mutaciones a sitio dirigido en las glicoproteínas E1 y E2 (M1 - E2 N263Q, M2 - E1 K245N/R247T y M3 - E2 Y400K/L402R) de la cepa vacunal atenuada 181/25, el cual expresa el gen reportero rojo fluorescente mKate2. Este trabajo tiene la finalidad de entender el papel que tienen ambas glicoproteínas en la gemación del virión en cultivos de células de mamíferos. Para determinar las consecuencias de las mutaciones se infectaron células HEK-293T en placas de 12 y 24 pozos y la infectividad relativa de las mutaciones se determinó por medio de microscopia de fluorescencia al comparar el área y la intensidad de las células fluorescentes infectadas con los mutantes con respecto a células infectadas con la cepa 181/25. La infectividad de cada mutante se determinó a las 24 horas post-infección; además, se determinó la cinética de infección. Estos experimentos determinaron que la interacción entre las proteínas E2 y C son necesarias para la gemación viral, y que sorprendentemente, tanto la formación de los heterodímeros como de los trímeros de las glicoproteínas contribuyen al proceso de ensamblaje y gemación. La morfología del proceso de gemación se estudió por medio de microscopía de transmisión de electrones en secciones ultrafinas. Mediante este proceso se evaluaron las consecuencias de las mutantes en el virión. Se determinó que las mutaciones no alteraron de forma drástica el tamaño de las partículas virales, pero si alteraron la formación del cuello que se genera durante el proceso de gemación. Debido a esto, podemos postular que el proceso de gemación del CHIKV, además de la forma del virión, depende de las interacciones C-E2, E1-E2, y de la formación de los trímeros. Esto nos lleva a pensar que la interacción entre C y E2 es necesaria para la gemación, pero no suficiente por si sola, se necesita además de E1 para que esta salida pueda suceder de forma correcta y completa. Sun, 01 Dec 2024 00:00:00 GMT https://repositorioinstitucional.uaslp.mx/xmlui/handle/i/9154 2024-12-01T00:00:00Z https://repositorioinstitucional.uaslp.mx/xmlui/handle/i/8839 Determinación del estado de salud clínico de hembras anidadoras de tortuga lora (Lepidochelys kempii) y tortuga verde (Chelonia mydas) en Nautla y Vega de Alatorre, Veracruz. Guevara Meléndez, Aida Mercedes El Golfo de México y en particular las playas del Veracruz en México, se consideran un importante sitio de anidación para la tortuga lora (Lepidochelys kempii) y la tortuga verde (Chelonia mydas). Así mismo es un área que ha sido muy impactada por diversos contaminantes a través de los años como hidrocarburos, metales pesados y otros xenobióticos que han puesto en peligro el equilibrio de la gran variedad de biodiversidad que el Golfo de México posee (Botello et al., 2005; Kenyon et al., 2001; Perry et al., 2015; Vázquez-Botello et al., 2004). El objetivo del presente estudio fue determinar el estado de salud integral de hembras anidadoras de tortuga verde y de tortuga lora en las playas del Nautla y Vega de Alatorre, Veracruz, en la temporada reproductiva 2023-2024. Se determinaron variables morfológicas y biomarcadores tempranos tales como hematología, bioquímica sanguínea y prueba de micronúcleos (MN) y se evaluó la relación de estos parámetros con factores endógenos (talla, especie, condición física) y factores exógenos (uso de playa). Los parámetros clínicos (hematológicos y bioquímicos) de ambas especies se encontraron dentro de rangos reportados en tortugas marinas sanas de otras poblaciones. El índice de salud físico reflejo un buen estado de salud para ambas poblaciones, pero no se correlacionó con ningún parámetro bioquímico en ninguna especie. Se obtuvieron diferencias significativas en valores bioquímicos de la tortuga verde entre las zonas de anidación, encontrándose mayores valores de glucosa y los menores valores de triglicéridos en las hembras que anidaron en la zona menos óptima para el desarrollo del nido (zona A). Se correlaciono la talla de los individuos de tortuga lora con los parámetros bioquímicos de nitrógeno ureico y urea, indicativos de buena condición corporal. En la misma especie se reportó también una relación positiva de la línea celular de defensa (leucocitos, linfocitos y monocitos) con la frecuencia de anormalidades nucleares lo que podría estarse generando por la presencia de contaminantes que estén activando su sistema inmunitario. No se encontraron diferencias significativas entre la frecuencia de anormalidades nucleares entre especies. La información generada podrá ser empleada como línea base en estudios posteriores enfocados en el seguimiento de la salud, de la exposición a contaminantes químicos y enfermedades que pudieran poner en riesgo la conservación de estas especies y del ecosistema costero Veracruzano.; The Gulf of Mexico, and in particular the beaches of Veracruz in Mexico, are considered a site of great importance for the nesting of the Kemp's ridley turtle (Lepidochelys kempii) and the green turtle (Chelonia mydas). It has been also an area heavily impacted by different pollutants over the years such as hydrocarbons, heavy metals and other xenobiotics that have endangered the balance of the wide variety of biodiversity found in the Gulf of Mexico. (Botello et al., 2005; Kenyon et al., 2001; Perry et al., 2015; Vázquez-Botello et al., 2004). The objective of this study was to determine the comprehensive health status of nesting females of green turtles and Kemp's ridley turtles on the beaches of Nautla and Vega de Alatorre, Veracruz, during the 2023-2024 reproductive season. Morphological variables and early biomarkers such as hematology, blood biochemistry and micronucleus test (MN) were determined and the relationship of these parameters with endogenous factors (size, species, physical condition) and exogenous factors (beach use) was evaluated. Clinical parameters (hematological and biochemical) for both species were within ranges reported for healthy sea turtles from other populations. The physical health index reflected a good health status for both populations, but did not correlate with any biochemical parameters in either species. Significant differences in green turtle biochemical values were obtained between nesting zones, with higher glucose values and lower triglyceride values found in females nesting in less optimal nesting areas (zone A). The size of the Kemp's ridley turtles was correlated with the biochemical parameters of urea nitrogen and urea, indicative of good body condition. In the same species, a positive relationship of the defense cell line (leukocytes, lymphocytes and monocytes) with the frequency of nuclear abnormalities was also reported, which could be generated by the presence of contaminants that are activating their immune system. No significant differences were found between the frequency of nuclear abnormalities among species. The information generated can be used as a baseline in subsequent studies focused on health monitoring, exposure to chemical contaminants and diseases that could endanger the conservation of these species and the coastal ecosystem of Veracruz. Mon, 23 Sep 2024 00:00:00 GMT https://repositorioinstitucional.uaslp.mx/xmlui/handle/i/8839 2024-09-23T00:00:00Z https://repositorioinstitucional.uaslp.mx/xmlui/handle/i/8781 Evaluación de la producción espacio-temporal de ROS, respuesta sistémica y expresión diferencial de genes en plantas de Arabidopsis afectadas en el catabolismo citoplasmático de espermina Alvarado Guitron, Paulina El proceso evolutivo en las plantas les ha permitido desarrollar diferentes mecanismos y estrategias de defensa en contra de patógenos, estableciendo una respuesta inmune de manera eficiente e inclusive promoviendo una inmunidad a largo plazo para futuras infecciones. Uno de los mecanismos de defensa es la respuesta hipersensible (HR), un tipo de muerte celular que se induce como el resultado de la detección de un elicitor en el sitio de infección. La HR se caracteriza por la limitación de los nutrientes al patógeno, así como la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) y ácido salicílico (SA). La resistencia sistémica adquirida (SAR) es considerada un tipo de resistencia en contra de futuras infecciones. Como resultado de una infección primaria, una serie de señales son sintetizadas y transmitidas al tejido no infectado promoviendo una inmunidad a largo plazo. Las poliaminas (PAs) son moléculas alifáticas de bajo peso molecular implicadas en diferentes procesos fisiológicos y en la defensa vegetal. El catabolismo de PAs es mediado por diferentes enzimas como la poliamina oxidasas (PAOs) que contribuyen en la formación del H2O2. El objetivo de este trabajo fue conocer la importancia del gen AtPAO1 de Arabidopsis thaliana, implicada en el catabolismo citoplasmático de PAs en el establecimiento de la HR y la SAR en respuesta a Pseudomonas syringae. Plantas Atpao1-1 infectadas con la cepa avirulenta tuvieron una menor muerte celular y perdida de iones, indicando una activación temprana de genes vinculados al establecimiento de la HR en comparación a Col-0. Plantas del ecotipo silvestre Col-0 establecieron una SAR como resultado de un priming mientras que la mutante Atpao1-1 y la sobreexpresora 35S::AtPAO1-L9 tuvieron títulos bacterianos reducidos previo a un priming con Pst; ambas líneas presentaron una SAR y una menor cantidad de UFC con respecto a Col-0. Una de las señales móviles implicadas en el establecimiento de la SAR son las ROS. La acumulación del H2O2 y del O2 .- fue evidente en los sitios de infección y en tejido distal. El uso de plantas sensoras Col-0-HyPer demostraron que cada una de las PAs aplicadas de manera exógena tiene un tipo particular de respuesta. Estos resultados indican que el catabolismo de PAs mediado por el gen AtPAO1 contribuye al establecimiento eficiente de respuestas inmunes a corto y largo plazo como la HR y la SAR.; The evolutionary process of plants has allowed them to develop different defense mechanisms and strategies against pathogens, establishing an efficient immune response and even promoting long-term immunity for future infections. One type of defense is the hypersensitive response (HR), a type of cell death induced by detecting an elicitor at the site of infection. The HR is characterized by nutrient limitation to the pathogen, and the production of reactive oxygen species (ROS) and salicylic acid (SA). The systemic acquired response (SAR) is a resistance against future infections. As a result of a primary infection, a series of signals are synthesized and transmitted to uninfected tissue promoting long-term immunity. Polyamines (PAs) are low molecular weight aliphatic molecules involved in different physiological processes and plant defense. PAs catabolism is mediated by various enzymes such as polyamine oxidases (PAOs) that contribute to H2O2 formation. This work aims to know the importance of the AtPAO1 gene of Arabidopsis thaliana, involved in the cytoplasmic catabolism of PAs in the establishment of HR and SAR in response to Pseudomonas syringae. Plants of the wild-type Col-0 ecotype established a SAR because of priming while the Atpao1-1 mutant and the 35S::AtPAO1-L9 overexpression had reduced bacterial titers prior to priming with Pst; both lines had a SAR and a lower CFU count relative to Col-0. One of the mobile signals involved in SAR establishment is reactive oxygen species (ROS). The accumulation of H2O2 and O2 .- was evident at infection sites and in distal tissue. Atpao1-1 plants infected with the avirulent strain had lower cell death and ion loss, indicating earlier activation of genes linked to HR establishment compared to Col-0. Using Col-0-HyPer sensing plants demonstrated that each of the exogenously applied PAs has a particular type of response. Our results indicate that AtPAO1 gene-mediated catabolism is an important contributor to establishing of short- and long-term immune responses such as HR and SAR. Wed, 28 Aug 2024 00:00:00 GMT https://repositorioinstitucional.uaslp.mx/xmlui/handle/i/8781 2024-08-28T00:00:00Z