Estudio de las interacciones proteína-RNA de MDM2 con p53 y Rb usando un sistema de inmovilización en sílice

Abstract

MDM2 es una proteína muy conservada porque al haber daño participa en la traducción no canónica de los supresores tumorales p53 y Rb, esenciales para regular el ciclo celular. En la literatura se ha caracterizado la interacción proteína-RNA de MDM2 con p53 y en paralelo a este trabajo se explora con el RNA de Rb. Esta investigación nace del interés en el comportamiento de MDM2 hacia los dos RNAs porque hipotetizamos una interacción simultánea. Nuestra propuesta de estudio es una inmovilización de RNAs en sílice funcionalizada y durante el desarrollo del proyecto nos enfocamos en la unión de cada RNA con MDM2. En este trabajo se produjeron proteínas recombinantes de MDM2 y se generaron RNAs de diferentes largos de p53 y Rb. Con estas biomoléculas se implementaron los ensayos ELISA y EMSA para estudiar la interacción de Rb con MDM2, con controles positivos como p53. En la EMSA se estandarizaron las condiciones para visibilizar la proteína y los RNA, y así comparar la migración de cada molécula. Como resultado se obtuvo que los 507 primeros ribonucleótidos de Rb son necesarios para la interacción in vitro con la fosfoproteína MDM2 S395D, especialmente los 265 ribonucleótidos del 5´UTR ya que un transcrito sin esta región carece de la unión, un comportamiento reportado previamente en células con la técnica PLA.